Cell Counting Kit-8
产品概述:CCK8包装规格 产品编号:IV08-100、 IV08-500、IV08-1000、IV08-2000、IV08-3000、IV08-10000规格: 100T 、 500T 、 1000T 、 2000T、 3000T、 10000T储存条件: 4℃避光保存,有效期一年。 操作说明:一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。2、按比例(例如:1/2 比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 3-5 个细胞浓度梯度,每组 3-6 个复孔。3、接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁,然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴),OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK 后的培养时间。)二、细胞活性检测1、在 96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在 37℃,5% CO2的条件下)。2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。5、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。三、细胞增值-毒性检测1、在 96 孔板中配置 100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时(在 37℃,5% CO2的条件下)。2、向培养板加入 10μL 不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或 48 小时)。4、想每孔加入 10μL CCK 溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。5、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。6、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。7、如果暂时不测定 OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加 CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。备注:①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK 试剂后的培养时间。②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入 CCK 试剂时, 建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰 OD 值读数。③白细胞可能需要培养较长时间。④当使用标准 96 孔板时,贴壁细胞的*小接种量至少为 1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的 10%加入 CCK 溶液。⑤如果没有 450nm 的滤光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片,但是 450nm 滤光片的检测灵敏度*高。⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。 活力计算:细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0 加药)-A(空白)] ×100A(加药):具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度 A(空白):具有培养基和 CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度A(0 加药):具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 保存条件:4℃干燥避光保存,有效期一年。只能用于科学研究使用,禁止用于人、动物或者其它用途 说明书:点击下载说明书引用及参考文献: