公司目前代理品牌如下：美国biolegend, 美国peprotech, 美国cst, 美国abcam, 美国santa cruz公司，台湾Abnova，美国Biovision，美国Thermo,美国NEB，美国Abgent，SIGMA Aldrich，美国Hyclone，美国labvision, 美国MRC, 美国Agdia, 美国Jackson, 美国Rd, 美国eBioscience, 美国Axygen, 美国Bio-Rad, 美国Millipore, 美国Qiagen, 美国Novus.

1.试剂和溶液RIPA buffer：20mM Tris (pH 7.5)，150mM NaCl，1mM Na2EDTA，1mM EGTA，2.5mM sodium pyrophosphate，1mM beta-glycerophosphate disodium salt hydrate，1mM Na3VO4，1µg/ml leupeptin hemisulfate salt，1% sodium deoxycholate，1% Triton X-100，1mM PMSF2.实验步骤--细胞裂解液制备1细胞收集：选择对数生长期的细胞，用预冷的PBS洗涤细胞，3000rpm，离心5min，弃上清；2细胞裂解：将细胞沉淀轻轻弹散，然后加适量预冷的RIPA buffer和PMSF进行裂解（1个100mm直径细胞培养皿加入100-200μl裂解液， 1ml RIPA buffer加10μl PMSF），放置于冰上，轻轻吹散细胞悬液，放置4℃冰箱或冰水混合物中裂解40-60min；3超声处理：首先观察裂解情况，如液体澄清说明裂解充分无需进行超声处理，否则裂解液不充分需要进行超声处理。方法如下：设置参数：次数10-30次，每次时间5-10s，取出4℃冰箱或冰浴的细胞裂解悬液置于超声仪里（冰上超声），超声完毕后需观察细胞裂解液是不是澄清，如果有浑浊，需再次进行超声；4离心测蛋白浓度：13000rpm 4℃，离心8min，取上清。另取10μl样品用Coomassie Brilliant Blue法测定蛋白浓度；5细胞裂解液处理：加入适量的5*Loading Buffer，混匀后沸水浴5-10min，取出0.5ml样品进行电泳及WB检测，其它分装置于-20℃保存。3.实验步骤—组织裂解液制备1取组织：新鲜或从-80℃冰箱/液氮中取出需要制备裂解液的组织，待组织解冻后放在盛有PBS液的培养皿中，用镊子夹住组织洗净组织中残留的血，并且尽可能除去脂肪和外膜；2把洗净的组织放入培养皿中，用剪刀将组织剪成小块（尽可能的小）；3裂解：将剪碎的组织小块转移至研磨器中，在冰浴中进行研磨一定次数后，加入适量预冷的RIPA buffer和PMSF继续研磨至组织无明显块状即可（一般 1ml RIPA buffer加10μl PMSF）；4将研磨好的组织裂解悬液转移至干净的离心管中，再用少量的RIPA buffer和PMSF清洗研磨器并倒入离心管中，冰浴中放置40-60min, 充分裂解，可间隔摇晃离心管或吹打数次；5超声处理：首先观察裂解情况，如液体澄清说明裂解充分无需进行超声处理，否则裂解液不充分需要进行超声处理。方法如下：设置参数：次数10-30次，每次时间5-10s，取出4℃冰箱或冰浴的细胞裂解悬液置于超声仪里（冰上超声），超声完毕后需观察细胞裂解液是不是澄清，如果有浑浊，需再次进行超声；6离心测蛋白浓度：13000rpm 4℃，离心8min，取上清（小心表面的脂肪和管底的组织碎片），另取10μl样品用Coomassie Brilliant Blue法测定蛋白浓度；7组织裂解液处理：加入适量的5*Loading Buffer，混匀后沸水浴5-10min，取出0.5ml样品进行电泳及WB检测，其它分装置于-20℃保存。  

1.试剂和溶液10X PBS：80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1L纯水，调pH至 7.4洗涤液：1× PBS：纯水稀释10X PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS固定液：4%多聚甲醛：4g多聚甲醛溶于100ml PBS通透液：0.1% triton-100封闭液：PBS配制的3% BSA抗体稀释液：一抗稀释液：3% BSA；二抗及鬼笔环肽稀释液：1X PBS；DAPI: 纯水稀释 2.实验步骤1细胞爬片：将盖玻片在酒精灯上灼烧片刻灭菌，铺在12孔板中，然后接种细胞，置于37℃，5% CO2培养箱过夜，待细胞形态完全伸展开并且处于健康状态，细胞密度为40%-50%（做爬片的细胞一般是复苏细胞传代2代后的细胞）； 2洗涤：倒掉细胞培养液，1×PBS轻微振荡洗涤2次,每次5min； 3固定：4%多聚甲醛固定细胞，室温放置20min,倒掉多聚甲醛，加入适量PBS； 4冻存：-20℃保存（如果直接使用，可跳至7）； 5解冻：常温下放置30 min； 6洗涤： PBS轻微振荡洗涤2次,每次5min； 7通透：加入适当体积的通透液室温放置10min。（若蛋白为膜表达则无需此步） 8洗涤：PBS轻微振荡洗涤2次,每次5min； 9封闭：加入适当体积的封闭液，室温放置30 min； 10一抗孵育：倒掉封闭液，加入适当体积及浓度的一抗，37℃孵育60min； 11洗涤：PBST轻微振荡洗涤3次,每次5min； 12二抗孵育：加入适当体积及稀释比的荧光二抗， 37℃避光孵育50 min；（如果一抗是荧光素标记的则无需此步）； 13洗涤：PBST轻微振荡洗涤3次,每次5min； 14核染色：加入适当体积及稀释比的核染料DAPI室温反应10min （如果无需加鬼笔环肽，可洗涤后跳至16）； 15洗涤：PBST轻微振荡洗涤3次,每次5min； 16细胞骨架染色：此步骤只针对有细胞核定位的项目；加入反应体积为0.2ml，适当稀释比的鬼笔环肽，避光37℃孵育60 min或4℃孵育过夜； 17洗涤：PBST轻微振荡洗涤2次,每次5min，纯水轻微振荡洗涤5min； 18封片：取干净的载玻片，分别标记和编号，在载玻片上滴加适量防荧光猝灭封片剂，用镊子取出盖玻片，细胞面朝下，盖在载玻片上； 19荧光显微镜观察，记录结果。 

1.溶液和试剂1）10 X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L纯水，调pH至 7.42）包被液：1X PBS 3）洗涤液：含0.05% Tween-20 的1X PBS（1X PBST）或纯水4）封闭液：10 mg/ml BSA(1% BSA，1X PBS配置)5）抗体稀释液：一抗、二抗均用1%BSA-PBS6）2M H2SO4终止显色： 108ml 98%H2SO4，加纯水稀释到1L 2.实验步骤1抗原准备：将抗原按适当浓度溶解于包被液中； 2包被：在对应的孔中加入100μl抗原，37℃孵育2小时或4℃过夜；3洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗5次；  4封闭：每孔加200μl封闭液，37℃孵育1小时；  5洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗3次； 6一抗：每孔加100μl一抗，37℃孵育2小时； 7洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗7次； 8二抗：每孔加100μl二抗，37℃孵育1小时； 9洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗7次； 10显色：拍干孔中残留液体，每孔加100μl TMB显色液，37℃避光显色10min；11检测：每孔加50μl 2M H2SO4终止显色，并立即读取450nm OD值。